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ABI PCR仪器常见故障维修

2021-02-19 16:06:15新闻中心

  ABI PCR仪器常见故障维修的原因:

  有很多可能性。这些错误的来源通常仍然不明。任何故障排除过程的先检查协议并重复实验。检查方案并请有经验的分子生物学家审查实验计划很重要。一位博士后研究员的告诫故事是,在意识到ABI PCR主混合物中缺少dNTP之前运行了几次失败的PCR,这提醒我们,即使是精疲力尽的科学家也容易受到简单错误的影响。

  反应组分的预混料中的错误或问题可能是所有样品和阳性对照扩增失败的灾难性原因。重复实验之前,请检查所有组分及其浓度。如果正在使用新一批试剂,则在进行一系列主要实验之前,对新旧试剂进行对比。

  切换母料产品时,必须认识到某些分析方法对缓冲液成分/退火温度(T a)/引物浓度组合特别敏感。更改其中任何一项可能会导致不同的性能。因此,在进行彻底更改之前,请验证所选主要混合物中和所有所需仪器上的所有测定法。查看每种预混液随附的说明也很重要,因为它们指定了针对给定酶,热启动机制和缓冲液成分优化的推荐条件。

  ABI PCR仪器热循环仪故障维修:

  仪器故障可能会起隐患,因此难以诊断。为避免昂贵的维修费用,请确保所有仪器操作员都经过全面的培训并受到的监督。一些仪器故障会导致灾难性故障,从而导致没有放大或荧光数据,而另一些仪器故障会使数据失真或以不均匀的方式处理样品,从而在相同的生物样品之间造成人为的差异。将对照样品与对照测定结合使用对于排除故障非常有用。当怀疑仪器出现故障时,应在所有孔中进行可靠,优化的测定。这种一致性检查将揭示特定于仪器区域的问题以及单独的测定和仪器问题。

  ABI PCR仪器探针检测失败维修解决:

   设计了基于探针的测定法来检测人cDNA样品中的EIFB1,但未显示扩增。初始反应在ABi StepOne仪器上使用兼容的试剂进行。尝试使用200 nM至900 nM的浓度范围优化引物,但没有改善。检验设计经过验证,发现适合于靶标,并且计算机模拟地预测这是一种高质量的检验。合成了新的引物,并使用不同的算子SYBR Green I试剂(因此试剂也有所不同)和仪器(Eppendorf Realplex)与原始合成的等分试样一起运行。在采用这种方法时,我们注意到主要目标是解决问题,而次要目标是解释失败。该反应从两批引物产生了相等的扩增。在这个阶段就显得反应问题铺设用探针,并因此新的探针合成和两个批次是通过在realplex实时仪器第二运营商使用LuminoCt相比®试剂(不同的试剂的那些试图)。两种探针均产生扩增数据,尽管值得注意的是,原始探针已在测试实验室之间张贴,因此在室温下在溶液中放置了几天,但新探针似乎比原始探针稍好。在这个阶段,很显然,当由LuminoCt第二操作运行原始和更换试验都起作用®在realplex实时荧光定量仪试剂。因此,原始失败的其余原因被认为是:

  操作员:一位经验丰富的科学家对该实验进行了多次重复,因此,这被认为是不太可能的解释。

  仪器:可能因为其他检测方法失败而出现问题。

  试剂:测试简单的解释。该LuminoCt 试剂相比,使用在ABI StepOne扩增仪两个寡批。反应未能与原试剂,但得到了良好的扩增,LuminoCt ®试剂

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