ABI PCR扩增仪没有信号故障维修:PCR 用户有时会遇到实时 PCR 实验的问题。它们的实时 PCR 曲线没有给出信号,或者它们在阴性对照中与信号复杂化。我们将尽力帮助用户解决您的 PCR 问题的主要原因以及如何解决这些问题。
ABI PCR扩增仪没有信号故障维修分析:
PCR 中没有模板。您的ABI PCR 中没有信号似乎是一个微不足道的原因,但请务必再次检查您是否已将模板添加到您的 PCR 中。这有时可以帮助您节省解决问题的时间和精力。PCR中有抑制剂。您的模板可能包含导致ABI PCR 不良的抑制剂,例如盐、SDS、苯酚、植物和人体组织或体液。解决方法:使用添加剂(BSA、DMSO、甜菜碱等)来增强您的 PCR 是合适的。下一个选项是使用内部阳性对照,可以检查 PCR 的正确性。探头质量或设计有问题。由于大量冻融循环或错误的长期储存,探头可能会部分退化。Generi Biotech 中合成的探针可进行 50 次冻融循环。也有可能是探针设计不当,没有与扩增产物结合。
如果阴性对照(或无模板对照)中有阳性信号,则可能存在以下一些问题:
您可能已将模板添加到您的 NTC 反应中。请重复分析以排除此问题。引物和探针设计存在问题。您的引物和探针可能会产生二聚体,而您的ABI PCR 在分析中会产生假阳性信号。尝试通过电泳或熔解分析来检查您的 PCR 产物。
ABI PCR扩增仪没有信号故障维修注意事项:
PCR 的灵敏度要求样品不受任何外源 DNA 或实验室环境中任何先前扩增的产物的污染。我们建议使用不同的区域进行样品制备、PCR 设置和 PCR 后分析。建议使用配备紫外线灯的层流柜来制备反应混合物。应建立两个物理上相互分离的站点。建立一个仅用于 PCR 反应设置的“pre-PCR 区域”。不应将“PCR 后区域”的物品引入该区域;这包括笔记本和钢笔等物品。建立一个“PCR 后区”,用于ABI PCR、纯化 PCR 扩增的 DNA、测量 DNA 浓度、运行琼脂糖凝胶和分析 PCR 产物。设备也应限制在这些区域。PCR 仪和电泳仪应位于 PCR 后区域。强烈建议使用带有气溶胶过滤器的移液器和移液器吸头,仅用于 DNA 样品和反应混合物的制备。其他建议包括:为ABI PCR 前和 PCR 后区域配备单独的移液器和移液器吸头、实验室外套、手套箱和废纸篓。标记 PCR 前和 PCR 后项目,因此它们不会从其指定的工作区域中移除。遵循 PCR 的黄金法则:切勿将ABI PCR 后区域中使用的任何试剂、设备或移液管带回 PCR 前区域。单独准备和储存ABI PCR 试剂,并仅将它们用于指定目的。试剂应分小份并储存在指定区域,具体取决于它们是用于ABI PCR 前还是 PCR 后应用。等分试样应与其他 DNA 样品分开存放。应始终执行省略模板 DNA 的对照反应,以确认不存在污染。此外,ABI PCR 循环的次数应保持在低限度,因为高度敏感的检测更容易受到污染的影响。